Una vez que las células que cultivamos

fábrica de célulasestán contaminados, la mayoría de ellos son difíciles de manejar.Si las células contaminadas son valiosas y difíciles de obtener nuevamente, se pueden utilizar los siguientes métodos para eliminarlas.

1. Usa antibióticos

Los antibióticos son más eficaces para matar bacterias enfábricas de células.La medicación combinada es más eficaz que la medicación sola.La medicación preventiva es más eficaz que la medicación después de la contaminación.La medicación preventiva generalmente utiliza un doble antibiótico (penicilina 100u/mL más estreptomicina 100μg/mL).Después de la contaminación, el método de limpieza debe ser de 5 a 10 veces mayor que la cantidad habitual.El medicamento debe usarse durante 24 a 48 horas después de la adición y luego reemplazarse con la rutina habitual.Fluido de cultivo.Este método puede ser eficaz en las primeras etapas de la contaminación.Además de la penicilina y la estreptomicina, los antibióticos utilizados también pueden incluir gentamicina, kanamicina, polimixina, tetraciclina, nistatina, etc. Los que se utilizan habitualmente son 400 a 800 μg/ml de kanamicina o 200 μg/ml de tetraciclina.El medio se cambia cada 2 o 3 días y se transmite durante 1 o 2 generaciones para el tratamiento.En los últimos años, se ha informado que los antibióticos 4-fluoro, 2-hidroxiquinolina (ciprofloxacina, Cip), derivado de pleu-romutilina (derivado de pleu-romutilina, BM-ciclina2: BM-1 y derivado de tetraciclina (BM-2)) son eficaz para matar micoplasmas cuando se usa solo o en combinación.Estos tres antibióticos se preparan en soluciones concentradas 250X en PBS y se almacenan a -20 °C para su uso posterior.La concentración de uso Cip es de 10 μg/ml, BM-1 es de 10 μg/ml y BM-2 es de 5 μg/ml.Cuando lo utilice, primero aspire el medio de cultivo contaminado, agregue medio de cultivo RPMI1640 que contenga BM-1, luego aspire el medio de cultivo después de 3 días, agregue medio de cultivo RPMI1640 que contenga BM-2 y cultive durante 4 días, y así sucesivamente durante 3 días consecutivos. .rondas, hasta que se demuestre mediante microscopía de tinción fluorescente 33258 que se ha eliminado el micoplasma, luego se agrega medio de cultivo normal para cultivo y pase 3-4 veces.

2. Tratamiento térmico

La incubación de un cultivo de tejido contaminado a 41°C durante 18 horas puede matar el micoplasma, pero tiene efectos adversos sobre las células.Por lo tanto, se debe realizar una prueba preliminar antes del tratamiento para explorar el tiempo de calentamiento que puede matar el micoplasma al máximo y tener el menor impacto en las células.En ocasiones, este método no es fiable.Si se trata primero con medicamentos y luego se calienta a 41°C, el efecto será mejor.

3. Utilice suero específico para micoplasmas

La contaminación por micoplasma se puede eliminar con suero inmune a micoplasma de conejo al 5% (título de hemaglutinación 1:320 o superior).Debido a que el anticuerpo específico puede inhibir el crecimiento del micoplasma, se vuelve negativo 11 días después del tratamiento con antisuero y permanece negativo 5 meses después.es negativo.Sin embargo, este método es más problemático y no tan conveniente y económico como el uso de antibióticos.

4. Otros métodos

Además de los métodos mencionados anteriormente para eliminar la contaminación, también existen métodos de inoculación y esterilización en animales, métodos de fagocitosis de macrófagos, métodos para agregar bromuracilo a animales contaminados.botellas de cultivoy luego irradiarlos con luz, métodos de filtración, etc., pero todos son más problemáticos e ineficaces.Por lo tanto, una vez que se produce la contaminación por micoplasma, a menos que sea de valor particularmente importante, generalmente se descarta y se vuelve a cultivar.

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